Mikroskopi: Gramfarging

Prinsipp

For å se bakterier i mikroskopet anvendes ulike fargemetoder. En viktig fargemetode er Gram-farging, oppkalt etter dansken Christian Gram som oppfant metoden i slutten av forrige århundre. Dette er en differensialfarging som utføres i flere trinn med forskjellige fargevæsker. Ved Gram-farging blir bakteriene enten rosa/røde eller blå/fiolette. Bakterier som farges blå/fiolette kalles Gram-positive og bakterier som farges rosa/røde kalles Gram-negative. Denne forskjellen i fargbarhet avspeiler en fundamental forskjell i oppbygningen av celleveggen og i en rekke andre grunnleggende egenskaper. Både Gram-positive (blå/fiolette) og Gram-negative (rosa/røde) bakterier tar opp gentianafiolett som er et blåfiolett fargestoff. Ved å tilsette jod-jodkalium etterpå dannes det et kompleks. Dette komplekset vil ikke la seg løse opp og vaskes ut med sprit hos de Gram-positive bakteriene, mens det løses opp og vaskes ut med sprit hos de Gram-negative bakteriene. Ved å tilsette det røde fargestoffet safranin, blir de Gram-negative bakteriene farget rosa/røde, mens hos de Gram-positive bakteriene legger rødfargen seg oppå den blå slik at bakteriene blir blå/fiolette.

Fremgangsmåte

Tolkning

Ved mikroskopi av Gram-preparat er det viktig å registrere bakterienes form, farge og anordning. Både tekniske faktorer (utførelse av farging) og biologiske faktorer (kulturens alder, antibiotikabehandling av pasienten forut for prøvetaking) kan bidra til varierende fargbarhet hos bakteriene.

Gram positive kokker i kjeder (venstre) og hauger (høyre)

mikroskopi_gram_positiv_kokker_kjeder mikroskopi_gram_positiv_kokker_hauger

Gram positive staver

mikroskopi_gram_positiv_staver

Gram negative staver

mikroskopi_gram_negativ_staver

Gram negative kokker

mikroskopi_gram_negativ_kokker